目錄號 | MP0109-5KU | 售價 | 3348.00元 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
規格 | 5KU | 運輸溫度 | -20℃凍存 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
其他名稱 | Phosphatase, Alkaline; Orthophosphoric-monoester phosphohydrolase (alkaline optimum); | 保存溫度 | 冰袋運輸 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
CAS號 | 9001-78-9 | 有效期 | 1年穩定 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
應用 | 分子生物學級別 | 訂購數量 |
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產品簡介: Alkaline Phosphatase(Calf Intestine), Molecular Biology Grade 小牛腸堿性磷酸酶(分子生物學級別)
產品信息
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產品內容
產品描述 堿性磷酸酶(Phosphatase, Alkaline,ALP,EC 3.1.3.1),是一種含兩個相同亞基的二聚體,也是一種約含12%碳水化合物(6%己糖和6%其他中性糖)的糖蛋白,每個ALP分子含4個鋅離子和4個二硫鍵。鎂離子存在情況下,ALP可達到最高酶活。AP能催化磷酸單酯水解,比如對硝基苯酚磷酸鹽(pNPP)、磷酸苯酯、酚酞磷酸、α-甘油磷酸、β-甘油磷酸、2- 磷酸甘油酸、磷酸丙糖、葡萄糖-6-磷酸、葡萄糖-1-磷酸、果糖-6-磷酸、腺苷-5-磷酸、腺苷-3-磷酸、磷酸烯醇式丙酮酸和β-煙酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸等。
堿性磷酸酶(ALP)常用來偶聯抗體和其他蛋白,從而滿足ELISA、WB和組織化學檢測上的應用。通常用來蛋白的去磷酸化實驗,比如酪蛋白和核酸等。當需要高檢測靈敏度時也能用來蛋白標記。還可用在DNA或RNA的5′-末端去磷酸以防止自連。經堿性磷酸酶的去磷酸化作用后,DNA或RNA還可被放射性標記磷酸鹽標記(通過T4多核苷酸激酶)。
本品是由分子量為50,000的單體組成的二聚體,活性形式為含有Zn2+的糖蛋白的金屬酶。本品是酵母重組表達的小牛腸(Calf Intestine)堿性磷酸酶,與大腸桿菌來源的酶相同,催化所有磷酸單酯的水解,不能催化磷酸二酯以及磷酸三酯的水解。達分子生物學級別,適用于去除載體DNA片段的5′-末端的磷酸基團。
活性定義 在37℃,pH9.8反應條件,每min內水解對硝基苯磷酸鹽(p-nitrophenyl phosphate, pNPP)生成1 μmol對硝基苯酚(p-nitrophenol)所需的酶量定義為1個活性單位(unit)。
保存與運輸方法 保存:-20℃凍存,1年穩定。 運輸:冰袋運輸。
注意事項 1) 本品最佳pH 8-10,最佳酶活受底物類型、底物濃度和離子濃度影響。本品正常保存穩定性很高,在螯合劑存在條件下,經65℃,30min加熱處理,99%活性不可逆失活(反應條件不同可能會有例外)。建議失活處理時使用苯酚,可使其完全失活。
2) 為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。 使用方法【DNA的去磷酸化,僅做參考】
1、在離心管內配制下列反應液:
2、37℃或50℃反應30min。也可以先在37℃反應15min,之后再50℃反應15min。 3、苯酚/氯仿/異戊醇(25:24:1)抽提2次; 4、氯仿/異戊醇(24:1)抽提; 5、添加2.5μl的3M NaCl(終濃度為150mM). 6、添加125μl的冰乙醇,在-20℃放置30~60min,離心。 7、用200μl 70%冰乙醇洗滌DNA沉淀并干燥。 8、用≤20μl的TE Buffer溶解沉淀。
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